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结核菌特异性排泄卵白的检测及其运用
泉源:  公布工夫:2014-05-09

近年来结核病疫情显现上升趋向,是现在感染率和死亡率最高的传染性疾病,对结核病的晚期诊断及疗效视察的检测要求愈来愈下。现在实验室主要依据结核菌的造就,抗酸染色和PCR要领,对血清中结核抗体的临床检测效果褒贬不一(1)。

 

我们接纳酶联免疫吸附实验检测血清及种种体液中的结核菌特异性排泄卵白,现讲演以下:
工具取要领
一、 研讨工具:结核病例组:2003年1月至2005年6月我院熏染科160例结核患者,均为初治患者,男102例,女58例,岁数13-61岁。诊断尺度以《肺结核诊断和医治指南》为尺度。个中肺结核126例,结核性脑膜炎14例,结核性胸膜炎16例,结核性腹膜炎4例。对比组:挑选康健查体中胸透一般、无结核病史的康健人,男女各20例,岁数24-51岁,均匀34岁。澳门新莆京小电影
二、 要领
1、试剂 酶联免疫吸附法(ELISA)测定血清中特异性排泄卵白试剂由台湾杏恩科技有限公司供应。
2、标本采集取处置惩罚:采集所有受试工具(结核病患者正在接管抗结核医治前)空肚静脉血3ml,3000转/min离心,星散血清,-20℃ 生存。然后采集受试者抗结核医治后24h、48h、96h、7天、14天、30天后空肚静脉血3ml,离心星散血清,-20℃  生存。
3、测定 ELISA检测按试剂盒说明书停止。详细历程以下:(1)与100ul差别浓度的尺度品及血清到场回响反映正在孔中,25 ℃ 安排1小时。(2)冲刷3次后,到场酶符号的抗体,25℃ 安排1小时。(3)冲刷3次后,到场TMB显色液,20分钟后,正在所有孔内都到场100ul停止液,混匀后即用Labsystems酶标仪(芬兰制造)正在450nm处测定各孔溶液的吸光度(A450)值。酶标仪内计算机主动读取并显现尺度曲线上取各吸光度相对应的浓度数值,cut off值吸光度为0.42。痰液及胸腹水抗酸染色按《天下临床磨练操作规程》第二版停止操纵。
效果澳门新莆京小电影
一、 160例结核患者血清结核菌特异性排泄卵白(A法)取抗酸染色(B法)检测效果睹表1。160例结核患者经ELISA要领检测血清中结核菌特异性排泄卵白阳性率为93.1%(149/160),结核患者标本经抗酸染色检测阳性率为30.6%(49/160),经X2磨练,两者有明显性差别(P〈0.01〉。
表1 160例患者血清结核菌特异性排泄卵白取抗酸染色检测效果对照
分组
例数
A法检出率(%)
B法检出率(%)
结核组
160
93.1(149/160)
30.6(49/160)*
对比组
40
0
0
注:*P〈0.01澳门新莆京小电影
二、两种检测要领的敏感性和特异性对照:见表2。
表2  血清结核菌特异性排泄卵白取抗酸染色法检测敏感度和特异性的对照
要领新萄京娱乐xpj
例数
敏感性(%)
特异性(%)
A
160
30.6*
100
B
160
93.1*
93.9
*P〈0.01
表2显现,血清结核菌特异性排泄卵白检测结核菌的敏感度为93.1%,特异性为93.9%,取抗酸染色法相比有明显性差别,特异性经统计学剖析两者无明显性差别。
三、抗结核医治后血清中结核菌特异性卵白会计师的静态转变。视察49例抗酸染色查到结核菌的患者医治后差别工夫点结核菌特异性排泄卵白含量转变,并同时停止痰液抗酸,效果发明46例患者抗结核医治48小时后结核菌排泄特异性卵白的会计师最先低落,14天后检测不到结核菌排泄特异性卵白。正在医治7天后有43例痰标本中仍能查到结核菌,但结核菌的数目显着削减。别的3例患者医治14天后结核菌排泄特异性卵白的含量没有转变,抗酸染色查到结核菌,提醒耐药结核菌的存在。
议论:
抗结核药物的不合理运用使耐药菌株络续泛起,以致结核病的疫性成为感染率和残废率最高的传染性疾病。正在结核病的临床诊断要领中,涂片镜检和造就是典范的细菌学检测要领,抗酸染色法固然具有轻便、快速、特异性下的长处,但其敏感性差、阳性检出率低,均匀检出率只要25%~35%(2),我们运用抗酸染色检测阳性率为30.6%,取文献报导邻近。别的抗酸染色法没法辨别死菌取活菌,因而其正在临床的运用遭到限定。不外抗酸染色法的阳性,检出效果具有弗成替换的诊断参考代价。细菌造就法因为结核菌发展迟缓,耗时少(通例造就需4~6周),对培养基要求高档也影响其阳性检出率,临床很少接纳造就要领检测结核菌。我们接纳ELISA要领检测结核菌排泄特异性卵白,因为该要领检测活扣核菌排泄的特异卵白,关于初诊的未用抗结核药医治的疑似患者具有很下的阳性率和特异性。经由过程对160例结核患者结核菌排泄特异性卵白的检测,发明其敏感率93.1%,显着优于抗酸染色法,同时该要领也具有很下的特异性(93.9%),因而,我们以为结核菌排泄特异性卵白的检测能够用于临床对初诊结核疑似病人的筛查实验。
结核菌排泄的特异性卵白是由活的结核菌所排泄,定量检测能够用于抗结核医治的结果视察,我们的实验效果发明抗结核医治48小时后结核菌排泄特异性卵白的含量最先低落,并跟着疗程的延伸而低落。同时,定量检测效果关于耐药结核菌也有肯定的提醒感化,抗结核医治无效的患者,其血清中结核菌特异性卵白的含量没有显着转变。
 我们的实验效果注解,结核菌排泄特异性卵白能够做为对初诊结核疑似病人的筛查及抗结核医治的疗效视察。因为其只适用于医治前活扣核菌的检测,关于抗结核芗医治后的患者,结核菌排泄特异性卵白的诊断感化将会遭到肯定的限定。